Categories:

Жизнеспособные подварианты SC0V-2 0micr0n, выделенные из тканей вскрытия

Известно, что вирус персистирует во многих органах из-за его тропизма к нескольким тканям. Однако в предыдущих отчетах не было точной информации о том, является ли вирус жизнеспособным и трансмиссивным. Было высказано предположение, что персистирующие резервуары SC0V-2 в тканях могут быть одной из множества потенциально перекрывающихся причин длительного C0 19.

Методы. В настоящем исследовании мы исследовали материалы вскрытия, полученные от 21 трупного донора с документально подтвержденным первым инфицированием или повторным инфицированием в момент смерти. Изученные случаи включали реципиентов различных составов вакцин против COVID-19. Цель состояла в том, чтобы обнаружить присутствие SARS-CoV-2 в легких, сердце, печени, почках и кишечнике. Мы использовали два технических подхода: обнаружение и количественная оценка вирусной геномной РНК с использованием RT-qPCR и инфекционность вируса с использованием разрешительной культуры Vero E6 in vitro .

Результаты. Во всех проанализированных тканях было обнаружено присутствие геномной РНК SARS-CoV-2, но на различных уровнях в диапазоне от 1,01 × 10 2 копий/мл до 1,14 × 10 8 копий/мл, даже среди тех, кто был вакцинирован против COVID-19. Важно отметить, что в культуральных средах исследуемых тканей было обнаружено разное количество вируса, способного к репликации. Самая высокая вирусная нагрузка была измерена в образцах легких (≈1,4 × 10 6 копий/мл) и сердца (≈1,9 × 10 6 копий/мл). Кроме того, на основе частичных последовательностей гена Spike характеристика SARS-CoV-2 выявила наличие среди них нескольких подвариантов Omicron, демонстрирующих высокий уровень нуклеотидной и аминокислотной идентичности.

Обсуждение: эти результаты подчеркивают, что SARS-CoV-2 может распространяться на несколько участков тканей, таких как легкие, сердце, печень, почки и кишечник, как после первичного заражения, так и после повторного заражения вариантом Omicron, что способствует расширению знаний о патогенезе. острой инфекции и понимания последствий клинических проявлений, наблюдаемых при постостром течении COVID-19.

...

Эти исследования вскрытия предоставили доказательства способности SARS-CoV-2 инфицировать несколько органов ( Edler et al., 2020 ; Deinhardt-Emmer et al., 2021 ; Fitzek et al., 2021 ; Maiese et al., 2021 ). . Более того, вскрытие материала из различных тканей выявило персистенцию геномной РНК SARS-CoV-2 в течение времени от 22 до 27 дней между смертью и вскрытием.Штейн и др., 2022 г. ). Хотя геномная РНК SARS-CoV-2 и даже субгеномная мРНК были обнаружены в нескольких органах, это не обязательно указывает на то, что вирус может реплицироваться и быть инфекционным (Casagrande et al., 2020 ; Wolfel et al., 2020 ; Aquila et al. ., 2021 г .; Бельтемпо и др., 2021 г .; Саблон и др., 2021 г.). В настоящее время факторы хозяина (время заражения, иммунитет, вызванный инфекцией SARSCoV-2 и/или вакциной) и факторы, связанные с вирусом (вариант, вирусная нагрузка), могут изменить течение COVID-19 и даже вероятность возникновения пост-COVID.

...Был изучен 21 труп, отправленный в судебный морг Аргентины в период с января по август 2022 года. У них было собрано 100 небольших образцов тканей из пяти различных органов: легких, сердца, печени, почек и тонкой кишки. Наиболее частые причины смерти включали респираторный дистресс-синдром взрослых с двусторонним поражением легких во время COVID-19, а также обострения ранее существовавших сопутствующих заболеваний и COVID-19.

Качественно РНК SARS-CoV-2 была обнаружена во всех тканях, проанализированных на оба изученных вирусных гена-мишени (ORF1ab, N), в 47 из 100 собранных образцов ткани, но с разной частотой: 13/21 в легких, 7/ 21 в сердце, 9/21 в печени, 8/21 в почках, а также 10/16 в ткани тонкого кишечника.

Среди исследованных случаев наличие РНК SARS-CoV-2 было подтверждено как минимум в одном образце ткани во всех случаях.

Количественно самая высокая вирусная нагрузка (выраженная в виде медианных значений в копиях РНК SARS-CoV-2/мл для ORF1ab и гена N) была измерена в образцах легких (4,4 × 10 3 и 6,2 × 10 3 ). В этой ткани вирусная нагрузка варьировала от 1,01×10 2 копий/мл до 1,14×10 8 копий/мл. Для сравнения, такие медианы вирусной нагрузки были ниже в печени (5,2 × 10 2 и 2,9 × 10 2 ), сердце (6,1 × 10 3 и 8,3 × 10 2 ), почках (4,7 × 10 2 и 6,0 × 10 2 ) и тонкая кишка (9,8 × 10 2 и 3,2 × 10 2 ) ( рис. 1А , Б ).

...Образцы (образцы тканей) со значением порога цикла (Ct) ≤25 при обнаружении РНК SARS-CoV-2 считались подходящими для получения последовательностей вирусного генома хорошего качества ( World Health Organization, 2022 ). Следуя этому критерию и основываясь на последовательностях гена Spike, мы смогли охарактеризовать 27 геномных РНК SARS-CoV-2 из 17 случаев (исключая случаи F, N, P и U). Филогенетическое родство после анализа NJ показало, что все нуклеотидные последовательности S-гена сгруппированы в вариантную кладу Omicron и были распределены в три различимых подварианта, включая 20, тесно связанных с BA.1.1, два, связанных с BA.5.2, и пять разделенных последовательностей. в кладе BA.2

...Выделение вируса из пяти исследованных образцов тканей (легкие, сердце, печень, почки и тонкий кишечник) проводили с использованием супернатантов из дезагрегированных тканей. Через 7 дней о наличии инфекционного SARS-CoV-2 свидетельствовало цитопатическое действие на монослои Vero E6.

Так, инфекционный SARS-CoV-2 был подтвержден после добавления супернатантов из тканевого экстракта на клетки Vero E6 в 9 из 21 образца легких (2 из случаев реинфекции), а также во внелегочных органах, в том числе в 14 из 21 сердца (4 из случаев реинфекции), 6 из 21 образца печени (3 из случаев реинфекции), 6 из 21 образца почек (1 из случаев реинфекции) и 3 из 16 образцов тонкой кишки (1 из случаев реинфекции) (рис. 1А , В ) .

Через 7 дней для определения наличия инфекционного (то есть способного к репликации) SARS-CoV-2 в образцах тканей мы провели его выделение в монослое клеток Vero. Мы оценили образование бляшек как литический цитопатический эффект. Так, инфекционный SARS-CoV-2 был подтвержден после того, как супернатанты из тканевого экстракта, добавленного на клетки Vero E6, были выявлены в 9 из 21 образцов экстрактов легких (3 из случаев реинфекции), а также во внелегочных органах, в том числе в 14 из 21 сердца ( 5 из случаев повторного заражения), 6 из 21 образца печени (2 из случаев повторного заражения), 6 из 21 образца почек (2 из случаев повторного заражения) и 3 из 16 образцов тонкого кишечника (2 из случаев повторного заражения) (рис. 1А , В ) . .

Образцы тканей от 6 из 8 реципиентов вакцины против COVID-19 были включены в число лиц с подтвержденной вирусной инфекционностью. Кроме того, инфекционный вирус был обнаружен в образцах тканей 5 из 9 легких, 6 из 14 сердец, 2 из 6 печени и 3 из 6 почек, в которых геномная РНК не определялась при прямом анализе. Поскольку в культуральной среде, использованной для последней промывки, не было обнаружено ни жизнеспособного вируса, ни вирусной РНК, можно сделать вывод, что выделенный вирус возник в результате репликации вируса.

Самая высокая вирусная нагрузка, измеренная с помощью RT-qPCR в 7-дневных супернатантах клеточной культуры (выраженная в виде медианных значений в копиях/мл, для ORF1ab и гена N), была обнаружена в легких (1,4 × 10 6 и 1,06 × 10 6 ) и образцы сердца (1,9×10 6 и 1,6×10 6 ). Такая вирусная нагрузка несколько снизилась в образцах печени (3,3×10 6 и 2×10 6 ), тонкого кишечника (3,4×10 2 и 1,4×10 3 ) и почек (3,2×10 6 и 2×10 6 ).

4. Дискуссия

Материал вскрытия, полученный от лиц с прижизненным диагнозом COVID-19, заразен благодаря наличию SARS-CoV-2. Судя по предыдущей серии вскрытий ( Desai et al., 2020 ; Trypsteen et al., 2020 ; Vincent and Taccone, 2020 ; Wolfel et al., 2020 ; Damiani et al., 2021 ), SARS-CoV-2 в первую очередь поражает легкие. а затем диссеминирует через кровь, поражая клетки различных пермиссивных органов и тканей. В нескольких исследованиях сообщается о сохранении выделения вирусной РНК в течение длительного периода после появления острых симптомов, а также о наличии вирусной РНК и/или антигена в желудочно-кишечных тканях выздоравливающих пациентов (Lamers et al., 2020 ;Трипстин и др., 2020 ; Мартин-Кардона и др., 2021 г .; Ченг и др., 2022 г .; Золльнер и др., 2022 г. ).

Присутствие реплицирующегося SARS-CoV-2 в образцах трупов ранее предполагалось путем обнаружения субгеномной РНК SARS-CoV-2 в посмертных мазках из носоглотки (Schroder et al., 2021; Grassi et al. , 2022 ) . Однако этот вывод ограничен тем фактом, что обнаружение субгеномных РНК SARS-CoV-2 не является окончательным показателем активной репликации ( Alexandersen et al., 2020 ). Недавно сообщалось о наличии жизнеспособного SARS-CoV-2 в различных тканях аутопсии ( Plenzig et al., 2021a ; Stein et al., 2022 ), но в образцах, полученных из двух эксгумированных трупов, его обнаружить не удалось ( Plenzig et al. , 2022). др., 2021б ).

Это исследование включает 21 случай (10 из них с предыдущей госпитализацией) с посмертными мазками из носоглотки, которые дали положительный результат на наличие РНК SARS-CoV-2. Было проведено вскрытие, из которого было взято 100 образцов тканей, включая легкие, сердце, печень, почки и тонкий кишечник.

Мы продемонстрировали наличие геномной РНК SARS-CoV-2, а также наличие вируса, способного к репликации, что является определенным доказательством жизнеспособности вируса независимо от статуса вакцинации против COVID-19. Однако у нас нет данных о наличии нейтрализующих антител против вируса. Было обнаружено пять случаев повторного заражения SARS-CoV-2, и, учитывая клинические записи, у них было несколько клинических признаков и симптомов, характерных для постострого COVID. Важно отметить, что вирусные частицы были выделены из образцов тканей этих случаев, а геномная характеристика SARS-CoV-2 не дала никаких доказательств преобладания вариантов вируса, таких как дельта, когда была проведена их первая диагностика инфекции, что дает дополнительную поддержку для событие повторного заражения.

Поскольку SARS-CoV-2 имеет множество отличительных мутаций, его можно распознать по частичным прямым последовательностям S-гена, включая RBD ( Европейский центр профилактики и контроля заболеваний, 2021 г .; Всемирная организация здравоохранения, 2021 г. ). Поэтому мы использовали этот подход для обнаружения присутствия трех различных подвариантов Omicron, включая BA.1.1 (20 из 27 изолятов), BA.2 (5 из 27) и BA.5.2 (2 из 27). . Такое распределение соответствует эпидемиологической карте Аргентины во время выборки ( Torres et al., 2023).). Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, поскольку полногеномное секвенирование (WGS) SARS-CoV-2 с использованием технологии секвенирования следующего поколения (NGS) остается золотым стандартом для отслеживания и выявления новых вариантов, особенно для характеристики меньшинств, включая ранее существовавшие. ( Берно и др., 2022 ).

Среди изученных случаев были реципиенты вакцины против COVID-19 с завершенными или внеплановыми прививками и даже с гибридным иммунитетом. Прорывные инфекции с подвариантами Omicron случаются часто.

Интересно, что исследованные ткани выявили присутствие SARS-CoV-2 путем обнаружения его геномной РНК и/или его инфекционности в клеточной культуре. Таким образом, вскрытие людей, умерших от COVID-19, связано с достоверным биологическим риском, поскольку вирус остается жизнеспособным в нескольких органах. Хотя в большинстве случаев количества сильно различались, вирусная нагрузка в образцах легочной ткани оказалась выше, чем в других органах, что, вероятно, указывает на неопределенные факторы, связанные с хозяином, такие как повышенное сродство к рецептору клеток человека и менее эффективный клиренс вируса между различными тканями. ( Бейер и Фореро, 2022 г.). Аналогичным образом, предсмертное клиническое состояние в изученных случаях различалось, что позволяет предположить, что вирусная нагрузка SARS-CoV-2 в легких может сильно различаться в зависимости от пролиферативной и экссудативной фаз диффузного альвеолярного повреждения, что само по себе вызывает полиорганную диссеминацию SARS-CoV-2. CoV-2 ( Делорей и др., 2021 г .; Одилов и др., 2021 г.). Поскольку образцы тканей были собраны в течение короткого посмертного интервала (в среднем 1,9 дня), даже между госпитализированными и не госпитализированными случаями, мы свели к минимуму систематическую ошибку из-за клеточного аутолиза, связанного с посмертными изменениями, которые изменяют внеклеточное пространство за счет высвобождения внутриклеточного содержимого. и влияние на посмертную вирусную нагрузку. Тем не менее, могут быть задействованы другие факторы, связанные с тканями и клетками, такие как их дифференциальная клеточная пермиссивность и относительное количество сверхпермиссивных клеток ( Lee et al., 2022 ). Кроме того, отсутствие РНК SARS-CoV-2 в гомогенате ткани не обязательно коррелирует с отсутствием жизнеспособного SARS-CoV-2. Кроме того, присутствие вирусной РНК не обязательно означает присутствие инфекционных вирусных частиц.

Это может отражать персистенцию РНК в тканях даже после элиминации инфекционного вируса ( Griffin, 2022 ). Образцы легких, сердца и почек показали свою инфекционность только при выделении SARS-CoV-2 в культуре клеток.

Время инфекционности SARS-CoV-2 в свежих трупных тканях и эксгумированных трупах даже после нескольких месяцев пребывания в земляной могиле требует дальнейшего изучения. Кроме того, поскольку число людей, выздоровевших от COVID-19, увеличивается, необходимо определить, можно ли и когда можно безопасно использовать органы от этих потенциальных доноров. Несколько доступных отчетов среди доноров с предшествующей инфекцией COVID-19 указывают на низкие показатели передачи реципиенту и дисфункцию трансплантированных органов в зависимости от инфекционного статуса ( Kute et al., 2021 ; Saharia et al., 2023 ). Однако до сих пор было проведено несколько исследований, указывающих на то, что нельзя полностью исключить передачу вируса при донорстве органов.

В заключение, это исследование подтверждает, что вскрытие случаев COVID-19 связано с постоянным биологическим риском, поскольку вирус остается жизнеспособным и с высокой нагрузкой, что требует максимальной осторожности при обращении со всеми трупами.

Таким образом, исследования с участием потенциально инфицированных трупов должны проводиться в адекватных условиях биобезопасности только опытными профессионалами и техническими операторами, использующими надлежащее защитное оборудование в соответствии с международными нормами биобезопасности (Центры по контролю и профилактике заболеваний, 2020 г. ) .

Отрицательные клинические записи SARS-CoV-2 не гарантируют микробиологически отрицательный результат, что подчеркивает важность проведения дополнительных клинических тестов и обследований доноров органов, выздоровевших от инфекции SARS-CoV-2. В конце концов, это исследование является веским аргументом в пользу продолжения исследований такого рода в будущем, чтобы охарактеризовать механизмы, лежащие в основе постострых последствий COVID-19 в легочных и широком спектре внелегочных систем органов. Это также дополняет наше понимание множественной тропности вируса к тканям даже после повторного заражения и вероятной персистенции SARS-CoV-2.

Frontiers | Viable SARS-CoV-2 Omicron sub-variants isolated from autopsy tissues

Pulmonary and extrapulmonary manifestations have been described after infection with SARS-CoV-2, the causative agent of coronavirus disease 2019 (COVID-19). The virus is known to persist in multiple organs due to its tropism for several tissues. However, previous reports were unable to provide...

www.frontiersin.org

Это исследование подтверждает наши опасения по поводу персистенции вируса в различных тканях и о важности ранней терапии способствующей быстрой элиминации вируса! (Прим. В.З.)

Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям.(обычно в начале публикации и в заголовке). Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.(в них идет скрин из т/к)

Отказ от ответственности: я не защищаю читателей, употребляющих иве или какие-либо другие препараты. Я не врач, а биохимик по образованию и никому не даю медицинских советов. Прежде чем принимать какие-либо лекарства, всегда консультируйтесь с лечащим врачом, которому доверяете.

ПОМНИТЕ. Вы находитесь под защитой Нюрнбергского кодекса и Хельсинской декларации. Хельсинкская декларация делает центральным документом этической исследовательской деятельности информированное согласие. Декларация определяет не только приемлемость известных и исследованных методов лечения, но принципы лечения больного альтернативными методами, к примеру, параграф 37 призван регулировать случаи, «когда не существует проверенного профилактического, диагностического или терапевтического метода. Когда существующие методы оказываются неэффективными, врач, получив обоснованное согласие пациента, должен иметь право применять непроверенные или новые профилактические, диагностические и терапевтические меры, если, по его мнению, они дают надежду на спасение жизни, восстановление здоровья или могут облегчить страдания. По мере возможности такие меры должны быть исследованы на предмет их безопасности и эффективности. Во всех случаях всю новую информацию следует регистрировать и, при необходимости, публиковать».

Полный текст ХД: https://budetlyanin108.livejournal.com/3489319.html

Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/

Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo

Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895

Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz

Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi

ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/

"Книга отзывов"

часть 1: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118230.html

часть 2: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118949.html

часть 3: https://budetlyanin108.livejournal.com/3211902.html

часть 4: https://budetlyanin108.livejournal.com/3417765.html

Ссылки по детоксикации спайк-белка:

https://budetlyanin108.livejournal.com/3144742.html

https://budetlyanin108.livejournal.com/3260643.html