Переназначение антипаразитарных средств для искоренения резистентного лейкоза

Несмотря на быстрый прогресс в геномном профилировании при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ), идентификация действенных мишеней и прогнозирование ответа на лекарства остается сложной задачей. Для выявления конкретных уязвимостей при ОЛЛ мы провели скрининг лекарств с использованием первичных образцов ОЛЛ человека, культивированных в модели микросреды костного мозга, в сочетании с анализом изображений с высоким содержанием. Среди 2487 протестированных соединений, одобренных FDA, антигельминтные агенты из класса макроциклических лактонов проявляли сильную противолейкозную активность, аналогичную уже известным противолейкозным агентам, используемым в настоящее время в индукционной химиотерапии. Валидация ex vivo на 55 образцах первичного ОЛЛ как В-клеток-предшественников, так и Т-ОЛЛ, включая случаи рефрактерных рецидивов, подтвердила сильную противолейкозную активность с IC 50значения в низком микромолярном диапазоне. Антигельминтные средства повышают уровень внутриклеточного хлорида в клетках первичной лейкемии, вызывая деполяризацию внешней мембраны митохондрий и гибель клеток. Поддерживая идею о том, что одновременное нацеливание на механизмы клеточной гибели под разными углами может усиливать ответ клеточной гибели, комбинация антигельминтных средств с антагонистом BCL-2 навитоклаксом или с химиотерапевтическим средством дексаметазоном показала синергетическую активность при первичном ОЛЛ. Эти данные демонстрируют противолейкозную активность антигельминтных средств и поддерживают использование стратегий перепрофилирования лекарств для выявления до сих пор нераспознанных противораковых средств, способных искоренить даже рефрактерный лейкоз.

Мы провели функциональный скрининг перепрофилирования лекарств на основе визуализации с использованием расширенной одобренной FDA библиотеки лекарств, которую мы протестировали на первичных рецидивирующих ОЛЛ, совместно культивируемых на мезенхимальных стромальных клетках (МСК) в модели микроокружения костного мозга 15. Неожиданно мы определили антигельминтные агенты моксидектин, иве и милбемицин, которые обладают высоким противолейкемическим потенциалом в качестве отдельных агентов и проявляют синергетическую активность с ингибитором BCL-2 навитоклаксом (ABT-263) и стандартными химиотерапевтическими агентами передовой терапии ОЛЛ. такие как дексаметазон при первичном ОЛЛ с высокой резистентностью.

... Неожиданно мы также идентифицировали несколько агентов из семейств лекарств, которые до сих пор не были связаны с противолейкозной активностью. Например, противогрибковые и антибактериальные агенты, а также сердечные гликозиды показали значительную противолейкозную активность (дополнительный рисунок S1A, B ). Наиболее эффективными из них были антигельминтные препараты иве, моксидектин и милбемицин, которые показали максимальный цитотоксический эффект до 80% по сравнению с идарубицином (рис. 1c ).

Выявив ивермектин, моксидектин и милбемицин в качестве потенциальных кандидатов с противолейкемической активностью, мы сначала подтвердили активность этих трех препаратов, построив кривые доза-ответ на том же образце ВСЕ, который использовался для скрининга. Интересно, что все три препарата показали сильный цитотоксический эффект при низких концентрациях в микромолярном диапазоне со значениями IC 50 от 1,2 до 1,5 мкМ (рис. 1d ), при этом моксидектин показал немного более высокую активность по сравнению с ивермектином и милбемицином. Чтобы оценить потенциал этих антигельминтных соединений, мы построили кривые доза-ответ для этих трех агентов для 47 предшественников B-ALL и 8 T-ALL PDX (рис. 2а).). Тестируемые образцы T- и B-ALL реагировали на три антигельминтных препарата со сравнимой чувствительностью среди двух типов лейкемии, со значениями IC 50 между 300 нМ и 2,5 мкМ для милбемицина и моксидектина и несколько более низкой чувствительностью к ивермектину, с некоторыми из них. проверенные случаи, показывающие значения IC 50 выше 3 мкМ (рис. 2а , дополнительная таблица S3 ). Интересно, что большинство проверенных образцов реагировали на моксидектин при значениях IC 50 1–1,5 мкМ, в то время как ответы на милбемицин были более распространены среди образцов (рис. 2а , дополнительная таблица S3).). Затем мы рассмотрели, можем ли мы определить дифференциальную чувствительность в образцах из разных групп риска, включая SR, MR, HR и VHR, в соответствии с классификацией, использованной в исследовании ALL-BFM 2000, а также в образцах рецидивов 16 . За исключением одного образца рецидива T-ALL, который показал очень высокую чувствительность к ивермектину и милбемицину, мы не смогли обнаружить существенных различий в чувствительности ко всем трем антигельминтным агентам в образцах. (Рис. 2б ). Однако стоит отметить, что большинство образцов рецидива реагировали на антигельминтные препараты в том же диапазоне чувствительности, что и образцы, собранные при постановке диагноза (рис. 2b).), предполагая, что эти агенты нацелены на механизм, который не выбирается во время прогрессирования от диагноза до рецидива.

Учитывая потенциал антигельминтных средств вызывать апоптотическую гибель клеток 26, но также активировать другие пути гибели клеток в других клеточных системах 27 , 28 , мы затем рассмотрели, какой механизм гибели клеток эти препараты запускают при первичном ОЛЛ. Мы протестировали моксидектин, ивермектин и милбемицин в образцах PDX, которые были истощены для эффекторных каспаз-3 и -7, используя редактирование генов, опосредованное CRISPR (C3 / C7KO; дополнительный рис. 2A, E ). В условиях отсутствия апоптоза клетки были одинаково чувствительны к моксидектину, наиболее сильному антигельминтному средству при ОЛЛ (рис. 2a ), без отличий от клеток дикого типа (WT) (рис. 3a , дополнительный рис. S3A).). Кроме того, предполагая независимый от каспаз механизм гибели клеток, тройной нокаут каспаз-3 / -7 и -6 (C3 / C7 / C2KO; дополнительный рис. S2B ) или каспазы-2 (C3 / C7 / C6KO; дополнительный рис. S2C) ) не спасали клетки при обработке моксидектином (рис. 3б ). Учитывая потенциал первичных ОЛЛ-клеток вызывать ответ некроптоза при истощении миметиков SMAC с использованием биринапанта 11 , мы также тестировали антигельминтные агенты при ОЛЛ, дефицитных по RIPK1 (RIPK1KO, дополнительный рис. S2D ), ключевому медиатору некроптоза. В нескольких различных первичных образцах RIPK1KO ALL мы не смогли обнаружить никакой разницы в чувствительности к антигельминтным агентам по сравнению с клетками WT (рис. 3c , дополнительный рис.S3B ). Даже при одновременной инактивации обоих путей гибели клеток, либо генетически при нокауте каспаз-3 и -7 и RIPK1 (C3 / C7 + RIPK1KO), либо при использовании фармакологических ингибиторов, мы не смогли обнаружить никакой разницы в чувствительности (рис. 3d , рис. Дополнительный рис. S3C ). Мы также могли исключить возможность того, что моксидектин запускал аутофагию (дополнительный рис. S3D ). Таким образом, антигельминтные средства уничтожают ОЛЛ с помощью альтернативного, независимого от каспаз, ненакроптотического механизма гибели клеток.

 Эти соединения обладали сильным антилейкемическим эффектом ex vivo в клетках первичного лейкоза при низких микромолярных концентрациях, расширяя более ранние исследования, в которых описывалась активность ивермектина при остром миелоидном лейкозе (AML) и других преимущественно солидных опухолях 26 , 28 , 40 , 41. Помимо антигельминтных средств, мы также идентифицировали другие семейства соединений с потенциальными противолейкозными средствами, такими как бактерицидные и фунгицидные средства. Однако эти соединения были активны в концентрациях, которые никогда не могли быть достигнуты in vivo, в то время как обширный опыт с антигельминтными средствами показывает, что они могут применяться в активных антилейкозных концентрациях in vivo (NCT03012828 (ссылка 42 )). Антигельминтный агент ивермектин широко используется для устранения эктопаразитов 43 , в то время как моксидектин был недавно одобрен FDA для лечения онхоцеркоза у людей 44 . Ранее было показано, что среди антигельминтных средств моксидектин имеет более безопасный профиль и лучшую эффективность при применении в качестве противопаразитарного лечения по сравнению с ивермектином.44 , 45 . Кроме того, в нескольких клинических испытаниях с участием моксидектина не сообщалось о серьезных побочных эффектах при дозах, в четыре раза превышающих дозу, используемую для лечения онхоцеркоза человека (NCT03012828 (ссылка 46 )). Кроме того, химическая структура моксидектина с высокой липофильностью увеличивает период полувыведения лекарственного средства 47 , наблюдение, которое может быть связано с его более высокой лекарственной эффективностью по сравнению с другими глистогонными средствами. Ивермектин, с другой стороны, безопасно применялся у пациентов с ослабленным иммунитетом для лечения чесотки 48 , 49. Этот привлекательный профиль безопасности вместе с сенсибилизирующей активностью по отношению к стероидам требует дальнейшей клинической разработки глистогонных средств, возможно, не в виде отдельных агентов, а в сочетании со стандартной химиотерапией для устранения минимального остаточного заболевания и предотвращения рецидивов. Еще один аспект, поддерживающий клиническую разработку, связан с активностью глистогонных средств в образцах из разных групп риска, включая SR ALL. Потенциал этих агентов улучшать реакцию на стероиды также в случаях с хорошим ответом и потенциально снижать токсичность можно проверить в клинических испытаниях.

Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям. Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.

Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/

Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo

Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895

Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz

Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi

ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/